روشهای بیوشیمی مطالعة سلول

دسته: شیمی
بازدید: 138 بار
فرمت فایل: doc
حجم فایل: 2010 کیلوبایت
تعداد صفحات فایل: 66

دیواره غالب سلولهای گیاهی دارای سلولز می‌باشد كه با املاح فلزات سنگین كنتر است ندارد اگر آنزیم سلولاز را روی سلول ثابت شده با آلدئید اثر دهیم سلولز به موادی كه ملكولهای ریز قابل حل در آب تبدیل می‌گردند این عمل منجر به از بین رفتن كنتر است تقاطعی كه قبلاً سلولز وجود داشت می‌گردد با این روش می‌توان پی به مقدار كمی سلولز در دیواره سلولزی و احتمالاً چ

قیمت فایل فقط 4,900 تومان

روشهای بیوشیمی مطالعة سلول

سیتوشیمی

     با كمك روشهای سیتوشیمی می‌توان ساختمانهای شیمیایی اجزاء سلول را در وضعیت طبیعی ( In Situ ) آن شناخت دو راه را برای این منظور وجود دارد :

1) استفاده از مواد شیمیایی كه در اثر تماس با مواد دیگر درون سلول واكنشی ظاهر سازند كه به كمك میكروسكوپ الكترونی قابل رؤیت است .

     برای مطالعة با میكروسكوپ نوری بایستی این مواد شیمیایی رنگی باشند و برای مشاهده در میكروسكوپ الكترونی باید این مواد مانع حركت الكترونها، یا باعث پراكندگی آنها گردند. (1)

2 ) امكان دوم استفاده از آنزیم‌هایی است كه بطور اختصاصی موادی را تجزیه نمایند این مواد بعداً در سلول قابل رؤیت نیستند تعیین اینكه محصول یك واكنش جزئی از ساختمان سلول است یا خیر زمانی ممكن است كه نتیجه واكنش سبب انباشتگی و تراكم ماده مورد جستجو گردد علاوه بر این واكنش باید طوری اختصاصی باشد كه قضاوت قابل اعتمادی را ممكن سازد از طرف دیگر اجزاء سلولی به قدر كفایت طبیعی باقی بمانند تا مقایسه و قضاوت را ممكن سازند (مثلاً تراكم موادی در میتوكندری زمانی قابل اثبات است كه ساختمان میتوكندری به شكل طبیعی آن موجود باشد با دو مثال مطالب فوق روشن می‌گردد :

     در نقاط مختلف سلول فسفاتاز یعنی آنزیمی كه هیدرولیز فسفات را تسریع می‌نماید وجود دارد اگر یك سلول ثابت شده با آلدئید را (آلدئید فعالیت آنزیمی را از بین نمی‌برد) با مخلوطی از فسفات محلول و نیترات سرب مجاور كنیم (قطره‌ای روی بافت قرار می‌گیرد) در نقاطی كه آنزیم موجود است فسفات هیدرولیز شده و تولید اسید فسفریك می‌نماید كه خود در اثر تركیب با نیترات سرب فسفات سرب به وجود می‌آورد .

     این تركیب غیر قابل حل در آب بوده و تولید رسوبی می‌نماید كه به شدت الكترونها را متفرق می‌كند به این ترتیب تمام نقاطی كه دارای فسفاتاز هستند در سلول مشخص می‌گردند .

     دیواره غالب سلولهای گیاهی دارای سلولز می‌باشد كه با املاح فلزات سنگین كنتر است ندارد اگر آنزیم سلولاز را روی سلول ثابت شده با آلدئید اثر دهیم سلولز به موادی كه ملكولهای ریز قابل حل در آب تبدیل می‌گردند این عمل منجر به از بین رفتن كنتر است تقاطعی كه قبلاً سلولز وجود داشت می‌گردد با این روش می‌توان پی به مقدار كمی سلولز در دیواره سلولزی و احتمالاً چگونگی سنتز آن پی برد . (2)

اتورادیوگرافی ( AUTORADIOGRDHY ) :

     ایزوتوپهای رادیواكتیو ایزوتوپهایی هستند كه هسته آنها در اثر تشعشع پیوسته تحلیل می‌رود این گونه ایزوتوپها در سیتولوژی برای ردیابی مواد معینی در سلول به كار گرفته می‌شود با كمك منوساكاریدهای علامت‌گذاری شده با₁₄ Cمی‌توان بوسیله روشهای اتورادیوگرافی یا به طور مستقیم توسط اندازه‌گیری فعالیت تشعشعی اجزاء مختلف سلول سنتز پلی‌ساكاریدها را مشخص كرد روش اخیر با كمك دستگاه مخصوصی به نام سین‌سیلاسیون شمار (نور ساطع كردن و برق زدن = Scintilation ) انجام می‌گیرد .

     در روش مستقیم اتورادیوگرافی می‌توان از میكروسكوپ نوری یا الكترونی استفاده كرد در هر دو مورد بافت بعد از دریافت ماده رادیو اكتیو ( خوراندن ـ تزریق ) ثابت آغشته و برش داده می‌شود مقاطع بعداً با لایه‌ای حساس یا فیلم پوشانده می‌شوند تشعشعات ماده رادیو اكتیو مثل اشعه نور صفحه فیلم یا ماده حساس دیگر را متأثر و فیلم پس از ظهور در محل سیاه شده مورد مطالعه قرار می‌گیرند شرط موفقیت دراتورادیوگرافی انتخاب ماده حساس برای پوشاندن مقاطع انتخاب زمان دقیق برای تأثیر اشعه و بالاخره ظاهر كردن مناسب ماده حساس یا فیلم می‌باشد معذالك نمی‌توان از این روش در هر موردی از سیتولوژی استفاده نمود اتورادیوگرافی بیش از هر روش دیگر به دقت و تجربه نیازمند است . (2)

جداسازی اجزاء سلول :

     برای انجام آزمایشات شیمی با اندازه‌گیری و مطالعه عمل اجزاء مختلفه یك سلول : لازم است كه این اجزاء از بقیه قسمتها جدا گردند برای این منظور سلولها هموژن می‌شوند بعد محتویات سلولها با كمك اولترا سانتریفوژ به صورت بخشهای مستقلی كه هر یك محتوی ساختمان خاصی از سلول هستند از هم جدا می‌گردند .

     عمل هموژن كردن در سلولهائی كه با دیواره سختی پوشیده نمی‌شوند از طریق شوك اسمزی با تأثیر امواج صوتی بالای Hkz 20 صورت می‌گیرد .

     سلولهای بادیواره سخت بایستی در هموژنیزاتور با چاقو یا گلوله‌های شیشه‌ای ذرات كوارتز و نظایر آن ساییده شوند در هر حال این عمل نباید موجب آسیب و در نتیجه كاهش فعالیت اجزاء سلولهای گردد عمل سانتریفوژ كردن در دو مرحله انجام می‌گیرد :

1 ) نوع ساده DiFFERENCIAL CENTIFU GATION

2 )‌جدا كردن به طریق هموژنی ( ISOPICNIC )

كروماتوگرافی ( CHROMATOGRAPHY ) :

     با كمك روشهای كروماتوگرافی ملكولهای مختلف بر اساس ویژگیهای متفاوت خود نظیر ملكول‌ها ( فیلترژله‌ای ) حلالیت در دو فاز ( كروماتوگرافی تقسیمی ) و بالاخره خصوصیات جذبی ( كروماتوگرافی جذبی ) از یكدیگر جدا می‌گردند . (3)

الكتروفورز ( ELECTROPHORESIS ) :

     ملكولهای دارای بارالكتریكی نظیر اسیدهای آمینه و پروتئینها در یك میدان الكتریكی توجه به نقطه ایزوالكتریك خود با سرعتهای متفاوت مهاجرت می‌نماید این كیفیت را الكتروفورز  می‌گویند پس در این روش ملكولهای دارای بار الكتریكی بر حسب سرعت خود مشخص از یكدیگر جدا می‌گردند عمل الكتروفورز می‌تواند در یك محلول بافر انجام می‌گیرد غالباً برای محلول بافر كه نقش الكترولیت را دارند ناقل سختی نظیر كاغذ لایه‌های نازك استات یازل پلی‌آكریل آمید ( Polyacrylamidgl ) انتخاب می‌گردد در اینجا ملكولها نه تنها به علت بار الكتریكی متفاوتشان بلكه بر حسب اندازه و شكل ملكول‌هایشان جدا می‌گردند هرچه وزن ملكولی بیشتر باشد حركت ملكول كندتر است ساختمان فضائی ملكولها نیز در حركتشان مؤثر است .

اساس كار به قرار زیر است :

     ژل جدا كننده با ژل یك ثانویه باروزنه‌های درشت پوشیده می‌‌شود كه روی آن محلول مورد آزمایش منتقل می‌گردد در میدان الكتریكی ملكولها در ژل ثانویه مهاجرت می‌نمایند و در مرز بین دو ژل در یك بخش نازك متمركز می‌شوند در اینجا ملكولها در ژل جدا كننده ( اولیه ) بر طبق اندازه ملكولها و تحرك الكتروفورزی خود جدا می‌گردند بین ژل جدا كننده ( اولیه ) و ژل جمع كننده ( ثانویه )، دو عامل غیر هماهنگ PH و اندازه روزنه‌ها در دو ژل موجود می باشند . (3)

فتومتری ( PHOTOMETRIE ) :

     عده‌ای از اجزاء سلولی این خاصیت را دارند كه امواج نوری با طول موجهای معین را جذب نمایند و با این كیفیت می‌توان این اجزاء را از نظر كیفی و كمی مورد مطالعه قرار داد . (3)

متد كشت سلول :

     تكنیك كشت سلول یا بافت در بیوشیمی بیولوژی ملكولی فیزیولوژی سلولی ژنتیك، جنین شناسی، انگل شناسی، بافت شناسی و غیره به كار می‌رود معمولی‌ترین سلولهایی كه كشت داده می‌شوند سلولهای باكتریها و سلولهای بافتهای پستانداران هستند برای كشت سلول باید اول محیط كشت مناسب آن نوع سلول خاص تهیه گردد كه در آن عوامل منبع انرژی سلولها، امواج، عوامل رشد، اسیدیته ( PH ) مناسب و حرارت مورد توجه قرار می‌گیرند .

     محیط كشت سلولهای پستانداران پیچیده‌تر از محیط كشت مورد نیاز سلولهائی نظیر باكتریهاست در ابتدای كار كشت سلول این‌طور معمول بود كه مخلوطی از سرم و عصارة جنین جوجه، به عنوان محیط كشت بكار برده می‌شدند در سلولهای اخیر محیط كشت تركیبی درست شده كه محتوی تركیبات متعددی است بعنوان مثال می‌توان محیط كشت تركیبی از آب، املاح و مواد معدنی و محتوی متابولیتهای زیادی باشد حتی امروزه علیرغم تركیبات پیچیده محیطهای كشت تركیبی به طور معمول لازم است كه از سرم جنین یا سرم اسب و غیره بعنوان تكمیل كننده محیط كشت كه باعث رشد سلول شود استفاده نمایند ساده‌ترین تكنیك برای مطالعه رشد سلولهای پرندگان و پستانداران متد برداشت بافت است قطعه كوچكی از بافت را روی لاملی كه با قطره‌ای از پلاسمای جوجه و محیط كشت پوشیده است قرار می‌دهند پلاسما سخت شده و منعقد می‌گردد لامل بر روی یك لام گرد برگدانده می‌شود به طوریكه بافت و پلاسما در سطح زیرین قرار گیرند اطراف لامل توسط پارافین مذاب با قلم‌مو كاملاً مسدود و كشت در محیط با حرارت مناسب نگهداری می‌شود  . 

قیمت فایل فقط 4,900 تومان

برچسب ها : روشهای بیوشیمی مطالعة سلول , طرح توجیهی روشهای بیوشیمی مطالعة سلول , دانلود روشهای بیوشیمی مطالعة سلول , شیمی , مطالعة سلول , سلول , سیتوشیمی , , , , متد كشت سلول , جداسازی اجزاء سلول , روشهای بیوشیمی , , دانلود طرح توجیهی , پروژه دانشجویی , دانلود پژوهش , دانلود تحقیق , پایان نامه , دانلود پروژه